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① 保存血清最好方法是什么?
我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃。但是若存放于4℃時(shí),請勿超過一個(gè)月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臒o菌容器內(nèi),再放回冷凍。反復(fù)凍融會(huì)對血清的品質(zhì)造成不良影響。
② 如何解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
我們建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
③ 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理?
血清在解凍過程(包括沒有*解凍)或儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如凝集素、纖維蛋白原和玻連蛋白等)可能會(huì)聚集成團(tuán),形成絮狀沉淀或外觀混濁;在運(yùn)輸過程中,由于時(shí)間較長,所以往往有少許解凍,因此也可能稍有沉淀,但這些都不影響血清性能。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過濾膜。
④ 何謂熱滅活?
一般是以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,因?yàn)榇思訜岵襟E,可以使補(bǔ)體去活化,而補(bǔ)體所參與的反應(yīng)有:溶細(xì)胞,平滑肌的收縮,肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放,增強(qiáng)吞噬作用,淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和激活。
⑤ 有必要作熱滅活嗎?
實(shí)驗(yàn)顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或*沒有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜遒|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱滅活的血清,沉淀物的形成,會(huì)顯著增多,這些沉淀物在導(dǎo)致顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)",常常會(huì)讓研究者認(rèn)為血清遭受污染,而把血清放進(jìn)37℃環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。
因此我們建議您,若非必須,您可以不做熱滅活處理血清。這樣,不僅節(jié)省您寶貴時(shí)間,更確保血清的質(zhì)量。只在做免疫學(xué)研究或培養(yǎng)干細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)才推薦做熱滅活。我公司也有已經(jīng)熱滅活的血清可供選擇。
⑥ 如何減少沉淀物的產(chǎn)生?
我們建議您在使用血清的時(shí)候,注意下列的操作:
● 解凍血清時(shí),請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時(shí),改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
● 解凍血清時(shí),請隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
● 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
● 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,則毋須做此步驟。
若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。