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胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。
1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。
2. 提供結(jié)合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。
5.起酸堿度緩沖液作用。
6.提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
一、內(nèi)毒素
內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外壁層上的*成分。當(dāng)細(xì)菌死亡自溶或粘附在其它細(xì)胞時,才表現(xiàn)其毒性。內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡,血清中內(nèi)毒素含量越低,對細(xì)胞毒性越小,越利于細(xì)胞的生長和傳代;內(nèi)毒素含量過高,會直接導(dǎo)致細(xì)胞提前老化。國際上規(guī)定,胎牛血清的級別,應(yīng)以內(nèi)毒素水平的高低來確定,其中,特級胎牛血清的內(nèi)毒素應(yīng)<10EU/ml
二、血紅蛋白含量
胎牛血清的顏色會根據(jù)血紅蛋白含量的不同表現(xiàn)出黃色、淡黃色、橘紅色、微紅色等。細(xì)胞培養(yǎng)用血清的標(biāo)準(zhǔn)是血紅蛋白含量不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高;反之,數(shù)值越低。實際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響。這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。
三、總蛋白含量
胎牛血清的總蛋白含量一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明采血的牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。
四、pH值
根據(jù)藥典,胎牛血清的pH值在7.0-8.0之間,并沒有什么具體依據(jù)把進(jìn)口血清和國產(chǎn)血清用7.5這個分界線界定。
五、滲透壓
胎牛血清滲透壓的檢測一般采用冰點法,滲透壓摩爾濃度(mOsmol/kg):280-360之間
六、微生物
包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體等。隨著各個品牌血清生產(chǎn)條件的改善提高,細(xì)菌、霉菌等“大型"微生物幾乎能100%控制。支原體通過0.1um3次無菌過濾去除。如CellMax胎牛血清,3次0.1um無菌過濾以后,又通過培養(yǎng)法和DNA染色法進(jìn)行支原體檢測,結(jié)果均呈現(xiàn)陰性才會放行銷售。關(guān)于噬菌體主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入,又無法過濾,很難*清除,但對血清質(zhì)量影響不大,不過對于工業(yè)生產(chǎn)的客戶來說,往往會采用γ照射的胎牛血清來避免噬菌體。
七、免疫球蛋白
免疫球蛋白的數(shù)值能*體現(xiàn)出采血時的牛齡情況,新生牛血清容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高;胎牛血清不含IgM,IgG的含量也較低??梢酝ㄟ^血清蛋白電泳SDS檢測。
低IgG的胎牛血清推薦適用于抗體生產(chǎn)及相關(guān)領(lǐng)域。
培養(yǎng)細(xì)胞死亡
可能原因:
1.培養(yǎng)箱內(nèi)無CO2;
2.培養(yǎng)箱內(nèi)溫度波動太大;
3.細(xì)胞凍存或復(fù)蘇過程中損傷;
4.培養(yǎng)液滲透壓不正確;
5.培養(yǎng)液中有毒代謝產(chǎn)物堆積 。
解決方法:
1.檢測培養(yǎng)箱內(nèi)CO2;
2.檢查培養(yǎng)箱內(nèi)溫度;
3.取新的保存細(xì)胞種;
4.檢測培養(yǎng)液滲透壓;
5.換入新鮮培養(yǎng)液。
WINSERA®胎牛血清 | 貨號 | 規(guī)格 | 庫存狀態(tài) |
優(yōu)級 | FBS500-WS-002 | 500ML | 現(xiàn)貨 |
特級 | FBS500-WP-002 | 500ML | 現(xiàn)貨 |
ES級別 | FBS500-WE-002 | 500ML | 現(xiàn)貨 |
無外泌體血清 | FBS050-EXO | 50ML | 現(xiàn)貨 |
WINSERA®特級胎牛血清適合培養(yǎng)哪些細(xì)胞?
1、特級胎牛血清具有非常的促細(xì)胞生長能力,適合培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞,原代細(xì)胞,部分干細(xì)胞和嬌貴細(xì)胞。
2、血清如何保存, 可以放多久?
3、貯藏溫度≤-15℃,可長時間保存; 4℃存放時,請勿超過一個月。
4、血清溶解以后,出現(xiàn)沉淀怎么辦?
5、若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400-600g離心5min,上清液即可加入培養(yǎng)基內(nèi)一起培養(yǎng)。 我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物, 一方面它可能會阻塞您的過濾膜;另一方面,過濾血清這種行為可能會導(dǎo)致血清中部分營養(yǎng)成分的流失。
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