目前,胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中常使用的試劑,為細(xì)胞生長(zhǎng)提供豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。但在外泌體研究中,如果仍然使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞、通過收集上清液來提取外泌體進(jìn)行實(shí)驗(yàn),胎牛血清中大量的牛源外泌體將對(duì)實(shí)驗(yàn)分析造成極大的干擾。因此,使用FBS時(shí),必須要做牛源外泌體的去除工作。那么,如何去除胎牛血清中的外泌體呢?
1、超速離心法
顧名思義,該法基于超高速離心機(jī)。有些廠家建議操作為120000g,18h,4℃;
2、超濾法
通過在Amicon ultra-15離心過濾器在3000g下持續(xù)55分鐘。
目前市面上已有蘇州千舍無外泌體血清,使用方法和常規(guī)胎牛血清一致,無需做額外處理。
下面一起來看看各種血清在超速離心法、超濾法、商品化三種方法下的外泌體去除效果。
FBS:常規(guī)胎牛血清
UC-dFBS:超速離心處理的去外泌體血清
UF-dFBS:超濾處理的去外泌體血清
SBI-dFBS:S品牌的商品化去外泌體血清
先對(duì)三組樣本做外泌體提取,將提取物用PBS重懸后用NTA檢測(cè),獲取的濃度數(shù)據(jù)可以看出:超濾處理方式和S品牌的顆粒殘留量相近,均較低;而用超離處理方式的顆粒殘留量要高出1-2倍。從顆粒值推算外泌體去除率,超濾處理方式和S品牌達(dá)到96%,超離處理方式僅達(dá)88%。所以,超速離心法的外泌體去除效果并不理想。
我們推薦您使用蘇州千舍無外泌體血清,其有效去除胎牛血清中的牛源外泌體,避免了自行處理的不確定性、污染風(fēng)險(xiǎn)以及處理后的驗(yàn)證工作,為您節(jié)約時(shí)間成本。