人iPS細(xì)胞   （國家干細(xì)胞資源庫） 人誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞 人誘導(dǎo)多功能細(xì)胞培養(yǎng)基 貼壁 克隆狀

細(xì)胞培養(yǎng):體外模擬體內(nèi)需要的生長條件（溫度，營養(yǎng)等），然后加上一些處理?xiàng)l件，比如做藥物篩選，就可以做抗性基因的表達(dá)的篩選，比如還可以測定某個(gè)基因敲低或是過表達(dá)的產(chǎn)物，這個(gè)當(dāng)然要結(jié)合WB來看最后基因的表達(dá)產(chǎn)物是否升高哦，細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用還有很多~~

細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理：細(xì)胞傳代（生存空間和營養(yǎng)不足，長得太密，代謝廢物太多，要洗洗，同時(shí)也要分離出一部分細(xì)胞，要加入新的培養(yǎng)液），換液（生存空間和營養(yǎng)剩余，但是代謝廢物太多，要洗洗，要吃飯，才能長好，所以要洗和加入新鮮培養(yǎng)基），凍存（太多了，先存起來，液氮里面里就是低溫，保存能量，活得久），復(fù)蘇（解凍，恢復(fù)吃飯的能力，恢復(fù)生長。）這四步。

細(xì)胞培養(yǎng)的基本步驟（一定要明白每個(gè)步驟的意義和目的）：

01細(xì)胞傳代（貼壁細(xì)胞）：試劑：PBS，含血清的培養(yǎng)基；流程：顯微鏡下看一看培養(yǎng)皿里的細(xì)胞多不多，太多（80%~90%）會(huì)導(dǎo)致代謝廢物很多，先吸掉廢液，再用PBS洗一洗，同時(shí)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞黏在一起，這時(shí)候就需要加點(diǎn)消除它們之間的粘性，是否消除完，在顯微鏡下看一看，看完加入適宜的含血清的培養(yǎng)基，中和一下胰，這叫吹打，除此之外，細(xì)胞太多了，把一部分細(xì)胞移出來，加入適量的培養(yǎng)基放入孵箱繼續(xù)培養(yǎng)，這叫傳代。02細(xì)胞換液：試劑：PBS，含血清的培養(yǎng)基；流程：先吸掉代謝廢物（即細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)液），再用PBS洗一洗，由于細(xì)胞長得不是很多，細(xì)胞之間沒有黏在一起，因此不需要加入胰來消除它們之間的粘性。由于細(xì)胞要吃飯，加入新鮮的含血清的培養(yǎng)基，最后放到孵箱里面進(jìn)行培養(yǎng)。

03細(xì)胞凍存：試劑：凍存液，PBS，胰，含血清的培養(yǎng)基；流程：要凍存，先配置凍存液，凍存液包含了：DMSO：防止在低溫（零度以下至-196℃）保存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)液會(huì)形成冰晶，滲透壓會(huì)發(fā)生改變，細(xì)胞結(jié)構(gòu)會(huì)出現(xiàn)紊亂，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)損傷。凍存液制備時(shí)，一般需與血清一起配置：因?yàn)閮烧呋ト跁r(shí)，會(huì)散發(fā)熱量，所以凍存液需提前制備。因?yàn)榧?xì)胞太多了，需要凍存，所以要先看一看，吸一吸，洗一洗，分一分，中和一下，吹打制成細(xì)胞懸液，離心，吸掉上清液，加入凍存液，輕輕吹吸均勻，每管等量1ml裝入凍存管，4℃20min,-20℃30min,-80℃過夜，最后放入液氮罐。04細(xì)胞復(fù)蘇：試劑：含血清的培養(yǎng)基；流程：從液氮中取出凍存管，迅速（小于3min）置于37℃水浴鍋中，解凍時(shí)，邊晃動(dòng)邊觀察，當(dāng)看到只有一小塊冰存在時(shí)，即可從水浴鍋中取出，打開凍存管，迅速將細(xì)胞懸液吸到離心管中，輕輕混勻，1000r/min,離心五分鐘，吸掉上清液，沉淀中加入適量培養(yǎng)液，放入孵箱中，培養(yǎng)。還有就是：復(fù)蘇的細(xì)胞，需要在24小時(shí)后，換一次培養(yǎng)液。最后：在這里特別感謝B站上無私分享的細(xì)胞培養(yǎng)的視頻資源，正是你們的分享，幫助了我，我也會(huì)繼續(xù)把我學(xué)到的繼續(xù)分享，幫助更多的人！如果大家想要獲得這份視頻資源的話，可以在后臺(tái)私聊小編獲取哦，里面關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)的知識(shí)講解的超級(jí)詳細(xì)！明天我會(huì)繼續(xù)介紹細(xì)胞培養(yǎng)的一些注意事項(xiàng)以及WB的操作的步驟和原理。最后，如果覺得我的推文對(duì)你有用的話，請點(diǎn)個(gè)關(guān)注哦！

細(xì)胞培養(yǎng):體外模擬體內(nèi)需要的生長條件（溫度，營養(yǎng)等），然后加上一些處理?xiàng)l件，比如做藥物篩選，就可以做抗性基因的表達(dá)的篩選，比如還可以測定某個(gè)基因敲低或是過表達(dá)的產(chǎn)物，這個(gè)當(dāng)然要結(jié)合WB來看最后基因的表達(dá)產(chǎn)物是否升高哦，細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用還有很多，歡迎大家在后臺(tái)留言。

細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理：細(xì)胞傳代（生存空間和營養(yǎng)不足，長得太密，代謝廢物太多，要洗洗，同時(shí)也要分離出一部分細(xì)胞，要加入新的培養(yǎng)液），換液（生存空間和營養(yǎng)剩余，但是代謝廢物太多，要洗洗，要吃飯，才能長好，所以要洗和加入新鮮培養(yǎng)基），凍存（太多了，先存起來，液氮里面里就是低溫，保存能量，活得久），復(fù)蘇（解凍，恢復(fù)吃飯的能力，恢復(fù)生長。）這四步。

GBC-SD 人膽囊癌細(xì)胞

JEKO-1 人套細(xì)胞淋巴癌細(xì)胞

CAL-27 人口腔鱗癌

DB 彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

mp38

nci-h226 人肺鱗癌細(xì)胞

hepg2.2.15 人肝癌細(xì)胞

SK-BR-3 人乳腺腺癌細(xì)胞

SNU-1 人胃癌細(xì)胞

su-dhl-6 人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

HL-60 人早幼粒急性白血病細(xì)胞株

kg-1 人急性骨髓性白血病細(xì)胞

nci-h209 人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

sk-hep-1 人肝癌細(xì)胞

sw579 人甲狀腺鱗癌細(xì)胞

nthy-ori-3-1 人甲狀腺正常細(xì)胞

bt474 人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

ncm460 人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞

hmec-1 人微血管內(nèi)皮細(xì)胞

mrc5 人胚肺細(xì)胞株

t2 (atcc) 人T2細(xì)胞

22rv1 人前列腺癌細(xì)胞

hct8 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

786-o 人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞

SKOV3-GFP 轉(zhuǎn)染GFP的人卵巢癌細(xì)胞

RKO 人結(jié)腸癌細(xì)胞

calu-1 人肺癌細(xì)胞

kb 人口腔表皮樣癌細(xì)胞

ovcar3 人卵巢腺癌細(xì)胞

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HCCLM3 人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞

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H9胚胎干細(xì)胞 人胚胎干細(xì)胞

caki-2 人腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞

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RL95-2 人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞

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mhcc-97H 人肝癌細(xì)胞(高轉(zhuǎn)移)

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細(xì)胞培養(yǎng)的基本步驟（一定要明白每個(gè)步驟的意義和目的）：

01細(xì)胞傳代（貼壁細(xì)胞）：試劑：PBS，含血清的培養(yǎng)基；流程：顯微鏡下看一看培養(yǎng)皿里的細(xì)胞多不多，太多（80%~90%）會(huì)導(dǎo)致代謝廢物很多，先吸掉廢液，再用PBS洗一洗，同時(shí)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞黏在一起，這時(shí)候就需要加點(diǎn)胰消除它們之間的粘性，是否消除完，在顯微鏡下看一看，看完加入適宜的含血清的培養(yǎng)基，中和一下胰，這叫吹打，除此之外，細(xì)胞太多了，把一部分細(xì)胞移出來，加入適量的培養(yǎng)基放入孵箱繼續(xù)培養(yǎng)，這叫傳代。02細(xì)胞換液：試劑：PBS，含血清的培養(yǎng)基；流程：先吸掉代謝廢物（即細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)液），再用PBS洗一洗，由于細(xì)胞長得不是很多，細(xì)胞之間沒有黏在一起，因此不需要加入胰來消除它們之間的粘性。由于細(xì)胞要吃飯，加入新鮮的含血清的培養(yǎng)基，最后放到孵箱里面進(jìn)行培養(yǎng)。

03細(xì)胞凍存：試劑：凍存液，PBS，胰，含血清的培養(yǎng)基；流程：要凍存，先配置凍存液，凍存液包含了：DMSO：防止在低溫（零度以下至-196℃）保存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)液會(huì)形成冰晶，滲透壓會(huì)發(fā)生改變，細(xì)胞結(jié)構(gòu)會(huì)出現(xiàn)紊亂，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)損傷。凍存液制備時(shí)，一般需與血清一起配置：因?yàn)閮烧呋ト跁r(shí)，會(huì)散發(fā)熱量，所以凍存液需提前制備。因?yàn)榧?xì)胞太多了，需要凍存，所以要先看一看，吸一吸，洗一洗，分一分，中和一下，吹打制成細(xì)胞懸液，離心，吸掉上清液，加入凍存液，輕輕吹吸均勻，每管等量1ml裝入凍存管，4℃20min,-20℃30min,-80℃過夜，最后放入液氮罐。04細(xì)胞復(fù)蘇：試劑：含血清的培養(yǎng)基；流程：從液氮中取出凍存管，迅速（小于3min）置于37℃水浴鍋中，解凍時(shí)，邊晃動(dòng)邊觀察，當(dāng)看到只有一小塊冰存在時(shí)，即可從水浴鍋中取出，打開凍存管，迅速將細(xì)胞懸液吸到離心管中，輕輕混勻，1000r/min,離心五分鐘，吸掉上清液，沉淀中加入適量培養(yǎng)液，放入孵箱中，培養(yǎng)。還有就是：復(fù)蘇的細(xì)胞，需要在24小時(shí)后，換一次培養(yǎng)液。最后：在這里特別感謝B站上無私分享的細(xì)胞培養(yǎng)的視頻資源，正是你們的分享，幫助了我，我也會(huì)繼續(xù)把我學(xué)到的繼續(xù)分享，幫助更多的人！如果大家想要獲得這份視頻資源的話，可以在后臺(tái)私聊小編獲取哦，里面關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)的知識(shí)講解的超級(jí)詳細(xì)！明天我會(huì)繼續(xù)介紹細(xì)胞培養(yǎng)的一些注意事項(xiàng)以及WB的操作的步驟和原理。

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