豬肝星狀細胞永生化（免疫熒光鑒定）

規(guī)格： 5*10 5   

細胞詳述

肝星狀細胞是細胞外基質(zhì)的主要來源，正常情況下肝星狀細胞處于靜止?fàn)顟B(tài)。當(dāng)肝臟受到炎癥或機械刺激等損傷時，肝星狀細胞被激活，其表型由靜止型轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ钚停涡菭罴毎せ畈⑥D(zhuǎn)化為肌成纖維細胞樣細胞，各種致纖維化因素均把HSC作為最終靶細胞。激活的肝星狀細胞一方面通過增生和分泌細胞外基質(zhì)參與肝纖維化的形成和肝內(nèi)結(jié)構(gòu)的重建，另一方面通過細胞收縮使肝竇內(nèi)壓升高。

該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。

注意事項：  收到細胞后第一次傳代建議1：2傳代，充液培養(yǎng)基是維持培養(yǎng)基，不能用來培養(yǎng)細胞。

細胞特性

1) 組織來源于實驗動物的正常肝組織。

2) 細胞鑒定：結(jié)蛋白（Desmin)或者平滑肌肌動蛋白（α-SMA）免疫熒光染色為陽性。

3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5) 細胞生長方式：梭形，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

產(chǎn)品的運輸和保存

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1) 1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

2) T-25培養(yǎng)瓶充滿wan全培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

產(chǎn)品使用

1) 本產(chǎn)品僅能用于科研

2) 本產(chǎn)品未通過直接用于活體動物和人的審核

3) 本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核

豬肝星狀細胞永生化相關(guān)細胞列表

人舌鱗癌細胞 CAL-27

人肺癌細胞 Calu-1

人肺腺癌細胞 Calu-3

人退行性癌細胞 calu-6

人卵巢腺癌細胞 CAOV-3

人胰腺癌細胞 Capan-1

人胰腺癌細胞 Capan-2

人腎透明細胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細胞 caki-1

人腎透明細胞癌 CAKI-2

人宮頸癌細胞 CaSKi

人正常結(jié)腸上皮細胞(有限細胞系） CCD841 CON

人急性淋巴細胞白血病細胞 CCRF-CEM

人急性淋巴細胞白血病細胞 CEM/C1

人卵巢癌細胞 CoC1

人結(jié)腸癌細胞 COLO205

人結(jié)直腸腺癌細胞 COLO320

人結(jié)直腸腺癌細胞 COLO320 DM

人結(jié)直腸腺癌細胞 COLO320 HSR

人結(jié)腸癌細胞 CW-2

結(jié)腸癌細胞 cx-1

人腦髓母細胞瘤細胞 D283 Med

人腦髓母細胞瘤細胞 D341 Med

人巨核細胞白血病細胞 DAMI

人髓母細胞瘤細胞 DAOY

人Burkitt's淋巴瘤細胞 DAUDI

人彌漫性大B細胞淋巴瘤細胞 DB

人結(jié)直腸腺癌細胞 DLD-1

人肺癌細胞 DMS 53

人前列腺癌細胞 DU145

人臍靜脈細胞融合細胞 EA.hy926

人食管癌細胞 Eca-109

人膀胱癌細胞 ECV-304

人膀胱癌細胞 EJ-1[EJ1]

人卵巢透明細胞癌細胞 ES-2

人腺癌細胞系 F56

人咽鱗癌細胞 FADu

人甲狀腺癌細胞 FTC-133

 人膽囊癌細胞 GBC-SD

 人膽囊癌細胞熒光素酶標(biāo)記 GBC-SD+LUC

人胃黏膜上皮細胞 GES-1

人肝癌細胞亞型（過表達谷氨酰氨合成酶） GS-HEPG2

人T淋巴瘤白血病細胞 H9/HTLV-IIIB

人胚胎干細胞H9 h9 Feeder Frec

人胚胎干細胞H1 h1

人永生化表皮細胞 hacat

人永生化表皮細胞熒光素酶標(biāo)記 HACAT+LUC

人支氣管上皮細胞 HBE135-E6E7

人整合SV40基因的乳腺上皮細胞 HBL-100

人乳腺導(dǎo)管癌細胞 HCC 38

人乳腺癌細胞 HCC1937

人非小細胞肺癌細胞 HCC827

人非小細胞肺癌細胞熒光素酶標(biāo)記 HCC827+LUC

人子宮鱗癌細胞(高分化)  HCC-94

人膽管細胞型肝癌細胞 hccc-9810

人高轉(zhuǎn)移肝癌細胞 HCC-LM3

永生化人腦微血管內(nèi)皮細胞 HCMEC/D3

人結(jié)腸癌細胞 HCT116

人結(jié)腸癌細胞熒光素酶標(biāo)記 HCT116+LUC

人結(jié)腸癌細胞 hct-15

人結(jié)直腸癌耐藥株 HCT15/Fu

人結(jié)直腸癌耐藥株 HCT-15/Taxol

人結(jié)直腸癌癌細胞 HCT-8

人子宮內(nèi)膜腺癌細胞 HEC-1-A

人子宮膜腺癌細胞 HEC-1-B

人胚腎細胞 HEK-293（293）

人胚腎細胞 HEK-293A

人紅白細胞白血病細胞 HEL

人子宮頸癌細胞 HELA

人宮頸癌細胞熒光素酶標(biāo)記 HELA+LUC  

01 什么是細胞永生化？

    正常組織來源的細胞在體外培養(yǎng)條件下可分裂生長，但經(jīng)過有限次數(shù)的傳代后，就會停止增殖，發(fā)生衰老和死亡，這種現(xiàn)象稱之為海夫利克極限。有的細胞自發(fā)或受外界因素的影響，可以從增殖衰老危機中逃離，從而擁有無限增殖的能力，該過程稱之為細胞永生化（cell immortalization）。

    細胞永生化是癌變的必經(jīng)途徑。

02 細胞永生化的方法？

    細胞自發(fā)永生化的幾率非常小，于人類細胞就更為罕見。

    人為干涉讓細胞永生化的方法包括：放射處理、端粒酶激活、病毒基因轉(zhuǎn)染、原癌基因激活、抑癌基因抑制等。其中，聽過慢病毒感染使細胞過表達猴腎病毒SV40 T抗原或人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶hTERT基因，是常用的兩種細胞永生化的方法。

01端粒酶激活

    端粒酶是一種能延長端粒末端的核糖核蛋白酶，由RNA和蛋白質(zhì)組成。端粒酶能以自身的RNA為模板，從端粒DNA3’-OH 末端延伸端粒或合成新的端粒DNA， 以補償細胞分裂時染色體末端的縮短，從而維持端粒的長度，使細胞不會因端粒耗盡而出現(xiàn)凋亡。

    正常情況下，大多數(shù)體細胞端粒酶的表達是嚴(yán)格調(diào)控的，表達是瞬時和低水平的。在原代培養(yǎng)的細胞中穩(wěn)定表達人端粒酶催化亞基(hTERT)基因能穩(wěn)定端粒的長度，使細胞易于永生化，因此hTERT的激活是細胞永生化的重要步驟。

    雖然激活端粒酶活性能夠使多種人和動物的細胞永生化，但是對于有些細胞，重建端粒酶活性并不足以使細胞永生化，還需要借助癌基因法。

02癌基因法

    一些原癌基因，如Myc, c-Jun, c-Ias, vsrc和Mdm2，通過基因轉(zhuǎn)染可介導(dǎo)目的細胞永生化。c-Myc是最早被發(fā)現(xiàn)的原癌基因，有許多與瘤化相關(guān)的功能區(qū)域，其轉(zhuǎn)錄表達的蛋白通過核膜進入細胞核與端粒酶的啟動子結(jié)合位點特異性結(jié)合，誘導(dǎo)端粒酶mRNA快速表達，直接激活端粒酶活性，促進細胞進入永生化。

    細胞永生化過程中，抑癌基因如p53, pRb, BRCA1, DPC4等，通過等位基因隱性作用、抑癌基因的顯性負(fù)作用等逐漸失去活性，細胞老化途徑受阻。實驗證明端粒酶的活性與抑癌基因表達產(chǎn)物的下調(diào)有相關(guān)關(guān)系，推測抑癌基因的失活協(xié)同端粒酶的激活共同參與細胞永生化進程。

03病毒基因轉(zhuǎn)染

很多病毒感染能夠誘導(dǎo)細胞永生化，例如EB病毒(epstein-barr virus, EBV)、猿猴病毒40 (simian virus40, SV40)和人乳頭瘤病毒(human papillomavirus, HPV)。這些病毒感染其天然宿主細胞，能誘導(dǎo)細胞永生化。

    EBV能使B淋巴母細胞永生化形成淋巴母細胞樣細胞系，它是通過潛伏蛋白激活細胞因子與其受體相互作用的途徑使細胞永生的。EBV永生化B細胞的一個顯著的特點是端粒酶活性的提高，這可能是導(dǎo)致B細胞永生的主要原因。目前，EB病毒介導(dǎo)的細胞永生化應(yīng)用最多的是B淋巴細胞，其他細胞中的應(yīng)用很少。

    SV40是簡單的真核細胞病毒，SV40的T抗原片段是常用的目的片段，將其整合入靶細胞核內(nèi)并表達，可導(dǎo)致細胞增殖活力的改變并表現(xiàn)出多種與腫瘤相關(guān)的轉(zhuǎn)化顯型。應(yīng)用的方法包括：野生型SV40病毒共培養(yǎng)感染靶細胞、磷酸鈣法、電穿孔以及逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法等。

    HPV已成功將人的包皮細胞、角化上皮以及乳腺、胰導(dǎo)管和口腔等的上皮細胞永生化。HPV病毒的早期表達蛋白E6和E7在細胞永生化中起決定性作用。E6和E7蛋白能夠改變細胞的終末分化，誘導(dǎo)細胞進入S期，使細胞繞過正常細胞的周期檢查點。

 

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