名稱：人正常胰腺類器官培養(yǎng)基試劑盒

貨號：WS002-100-KIT/WS002-500-KIT

規(guī)格：100ml/500ml

品牌：WinSera

人正常胰腺類器官培養(yǎng)基是一款促進人正常胰腺類器官體外形成和擴增的培養(yǎng)基。該產(chǎn)品為無菌的液體混合系統(tǒng)，含有維持目的細胞生長所必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物以及生長因子等。該培養(yǎng)基的du特配方可以提供一個合適的細胞所需營養(yǎng)環(huán)境，促進人正常胰腺類器官的體外生長和擴增。
一、試劑盒組成：

、1、原代
（1）將組織放入含有特殊組織保存液E的組織取樣瓶中，快速轉(zhuǎn)運至潔凈實驗室進行組織處理和干細胞分離，拍照并登記信息。
（2）準(zhǔn)備若干培養(yǎng)皿，加入 4℃預(yù)冷的人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B備用。
（3）取樣瓶消毒，將組織放入培養(yǎng)皿中，利用人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B清洗三次后，利用眼科jian或手術(shù)dao將腫瘤組織jian切成體積約為 1-3 mm3的組織塊。
（4）組織用人正常胰腺原代組織xiao化液C消化，37℃震蕩消化10-20 min，（消化過程中隨時觀察消化情況）。
（5）取少量液體在顯微鏡下觀察，鏡下觀察到較多的單個細胞或 70 um 以下的細胞簇后，加入三倍體積人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B終止消化。
（6）使用100 um孔徑的篩網(wǎng)進行過濾，將濾液收集后，于300 g富集離心5 min后移去上清，添加人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B重新重懸離心。
（7）基質(zhì)膠計算：第6步后觀察收集到的組織體積，添加25倍組織體積的基質(zhì)膠（abs9495）重懸鋪板。
（8）24孔細胞培養(yǎng)板為例，每孔點膠25 ul組織基質(zhì)膠混合物進行鋪板（4℃下操作）。
（9）將鋪好的培養(yǎng)板放入37℃培養(yǎng)箱中10-15 min成膠，添加人正常胰腺類器官培養(yǎng)基A（恢復(fù)室溫）進行培養(yǎng)。

2、類器官傳代培養(yǎng)
（1）移液器吸去培養(yǎng)基，每孔添加1-2 ml 4℃類器官緩沖液B放置2 min。
（2）移液槍輕柔吹打基質(zhì)膠，收集在15 ml離心管中，4℃靜置10 min。（每6-8孔為一組）
（3）A：類器官數(shù)量不足或體積較小時： 離心5 min棄去上清，添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B重懸移入1.5 ml離心管，300 g離心5 min棄去液體進行第4步。
         B：類器官數(shù)量較多或體積較大時：離心5 min棄去上清，添加適量類器官傳代消化液D消化2-3 min，添加人正常胰腺類器官緩沖液B終止消化，離心5 min棄去混合液，添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B重懸移入1.5 ml離心管，300 g離心5 min棄去液體進行第4步。
（4）類器官收集后，添加基質(zhì)膠重懸，每孔25 ul基質(zhì)膠鋪在24孔細胞培養(yǎng)板中，放置培養(yǎng)箱中10-15 min添加500 ul人正常胰腺類器官培養(yǎng)基A。

3、類器官凍存
（1）移液器吸去培養(yǎng)基，每孔添加1-2 ml 4℃類器官緩沖液B放置2 min。
（2）移液搶輕柔吹打基質(zhì)膠，收集在15 ml離心管中，4℃靜置10 min。（每6-8孔為一組）
（3）離心5 min棄去上清，添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B再次重懸，300 g離心5 min棄去液體。
（4）添加適量類器官凍存液F，輕柔吹打重懸，以24孔細胞培養(yǎng)板為例：密度為2個孔凍存1管，每管體積4 ml。
（5）做好標(biāo)記信息，進行程序降溫后，移入液氮長期保存。

4、類器官復(fù)蘇
（1）取10 ml人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B于15 ml離心管中。
（2）從液氮罐中取出凍存的類器官細胞，快速置于 37℃水浴鍋中融解。
（3）水浴融解過程中，需輕輕搖動冷凍管，以確保凍存液在 1-2 min內(nèi)wan全融解。
（4）將溶解后的類器官細胞快速轉(zhuǎn)移至15 ml 離心管，使用移液管輕輕吹打6-8次，300 g離心5 min，然后除去上清液并收集類器官細胞沉淀。添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B重懸移入5 ml離心管300 g離心5 min。
（5）基質(zhì)膠重懸，每孔25 ul基質(zhì)膠鋪在24孔細胞培養(yǎng)板中，放置培養(yǎng)箱中10-15 min成膠，添加500 ul人正常胰腺類器官培養(yǎng)基A。
（1）將組織放入含有特殊組織保存液E的組織取樣瓶中，快速轉(zhuǎn)運至潔凈實驗室進行組織處理和干細胞分離，拍照并登記信息。
（2）準(zhǔn)備若干培養(yǎng)皿，加入 4℃預(yù)冷的人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B備用。
（3）取樣瓶消毒，將組織放入培養(yǎng)皿中，利用人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B清洗三次后，利用眼科jian或手術(shù)dao將腫瘤組織jian切成體積約為 1-3 mm3的組織塊。
（4）組織用人正常胰腺原代組織xiao化液C消化，37℃震蕩消化10-20 min，（消化過程中隨時觀察消化情況）。
（5）取少量液體在顯微鏡下觀察，鏡下觀察到較多的單個細胞或 70 um 以下的細胞簇后，加入三倍體積人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B終止消化。
（6）使用100 um孔徑的篩網(wǎng)進行過濾，將濾液收集后，于300 g富集離心5 min后移去上清，添加人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B重新重懸離心。
（7）基質(zhì)膠計算：第6步后觀察收集到的組織體積，添加25倍組織體積的基質(zhì)膠（abs9495）重懸鋪板。
（8）24孔細胞培養(yǎng)板為例，每孔點膠25 ul組織基質(zhì)膠混合物進行鋪板（4℃下操作）。
（9）將鋪好的培養(yǎng)板放入37℃培養(yǎng)箱中10-15 min成膠，添加人正常胰腺類器官培養(yǎng)基A（恢復(fù)室溫）進行培養(yǎng)。

2、類器官傳代培養(yǎng)
（1）移液器吸去培養(yǎng)基，每孔添加1-2 ml 4℃類器官緩沖液B放置2 min。
（2）移液槍輕柔吹打基質(zhì)膠，收集在15 ml離心管中，4℃靜置10 min。（每6-8孔為一組）
（3）A：類器官數(shù)量不足或體積較小時： 離心5 min棄去上清，添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B重懸移入1.5 ml離心管，300 g離心5 min棄去液體進行第4步。
         B：類器官數(shù)量較多或體積較大時：離心5 min棄去上清，添加適量類器官傳代消化液D消化2-3 min，添加人正常胰腺類器官緩沖液B終止消化，離心5 min棄去混合液，添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B重懸移入1.5 ml離心管，300 g離心5 min棄去液體進行第4步。
（4）類器官收集后，添加基質(zhì)膠重懸，每孔25 ul基質(zhì)膠鋪在24孔細胞培養(yǎng)板中，放置培養(yǎng)箱中10-15 min添加500 ul人正常胰腺類器官培養(yǎng)基A。

3、類器官凍存
（1）移液器吸去培養(yǎng)基，每孔添加1-2 ml 4℃類器官緩沖液B放置2 min。
（2）移液搶輕柔吹打基質(zhì)膠，收集在15 ml離心管中，4℃靜置10 min。（每6-8孔為一組）
（3）離心5 min棄去上清，添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B再次重懸，300 g離心5 min棄去液體。
（4）添加適量類器官凍存液F，輕柔吹打重懸，以24孔細胞培養(yǎng)板為例：密度為2個孔凍存1管，每管體積4 ml。
（5）做好標(biāo)記信息，進行程序降溫后，移入液氮長期保存。

4、類器官復(fù)蘇
（1）取10 ml人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B于15 ml離心管中。
（2）從液氮罐中取出凍存的類器官細胞，快速置于 37℃水浴鍋中融解。
（3）水浴融解過程中，需輕輕搖動冷凍管，以確保凍存液在 1-2 min內(nèi)全部融解。
（4）將溶解后的類器官細胞快速轉(zhuǎn)移至15 ml 離心管，使用移液管輕輕吹打6-8次，300 g離心5 min，然后除去上清液并收集類器官細胞沉淀。添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B重懸移入5 ml離心管300 g離心5 min。
（5）基質(zhì)膠重懸，每孔25 ul基質(zhì)膠鋪在24孔細胞培養(yǎng)板中，放置培養(yǎng)箱中10-15 min成膠，添加500 ul人正常胰腺類器官培養(yǎng)基A。

三、儲存/保存方法

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溫馨提示：本產(chǎn)品僅作科研實驗使用，不支持臨床等研究

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